實驗部分

化學制(zhi)品。這些(xie)化合(he)物要(yao)么在羅(luo)氏(shi)創新中心(xin)合(he)成，要(yao)么從(cong)不同的商業來(lai)源購買(mai)。通(tong)(tong)過(guo)向1 L蒸餾水中添加4.86 g KH2PO4和2.02 g Na2HPO4（密(mi)蘇里州圣路易斯市西格(ge)瑪），制(zhi)備(bei)pH值為6.5、0.05 M的磷酸鹽緩沖液，然后通(tong)(tong)過(guo)密(mi)理博Express PLUS過(guo)濾(lv)器（德(de)國(guo)達姆施塔(ta)特密(mi)理博0.22μM）過(guo)濾(lv)。FaSSIF buffer準備(bei)從(cong)SIF粉(fen)末（BioReavangtcom，Croydon，英國(guo)），根據一個(ge)詳細的協議。15

在(zai)水和(he)(he)FaSSIF介(jie)質中的(de)平衡溶(rong)解度。將(jiang)精確稱量(liang)的(de)約1 mg化(hua)(hua)合物干粉置于玻璃管中，并添加330μL緩(huan)沖(chong)液(ye)(ye)。然后將(jiang)樣品(pin)超聲處理1小時（Branson 1210，Branson Ultrasonics，Danbury，CT），在(zai)室溫下搖動(dong)2小時，并靜置過(guo)夜以平衡。第(di)二天，檢查樣品(pin)的(de)pH值(zhi)，并通過(guo)MultiScreenHTS PCF過(guo)濾(lv)器（德(de)國達姆施塔特密理博）過(guo)濾(lv)溶(rong)液(ye)(ye)。用(yong)0.05 M HCl/20%乙腈（v/v）稀(xi)(xi)釋濾(lv)液(ye)(ye)的(de)等份，以生(sheng)成三種(zhong)不(bu)同的(de)樣品(pin)：未稀(xi)(xi)釋和(he)(he)稀(xi)(xi)釋為1:10和(he)(he)1:100。化(hua)(hua)合物校準曲線由在(zai)0.05 M HCl/20%乙腈（v/v）中稀(xi)(xi)釋的(de)標(biao)準1 mg/mL二甲基亞砜溶(rong)液(ye)(ye)生(sheng)成。校準標(biao)準品(pin)和(he)(he)樣品(pin)隨后通過(guo)LC進行分析(xi)?紫外(wai)線?MS，如下所述。

溶解(jie)度增強SE計算為在FaSSIF和水性緩(huan)沖液中(zhong)測(ce)得的溶解(jie)度比率（等式1）：

表(biao)面(mian)活性(xing)測(ce)定。化合物(wu)在(zai)(zai)(zai)DMSO中(zhong)連續稀(xi)釋(shi)超過12種不(bu)同濃度(du)，并在(zai)(zai)(zai)pH值為(wei)6.5的0.05 M磷酸鹽緩沖液中(zhong)添(tian)加至(zhi)最終(zhong)10%的DMSO含量。最終(zhong)化合物(wu)濃度(du)默認范(fan)(fan)圍為(wei)10 nM至(zhi)10 mM。在(zai)(zai)(zai)第二次實(shi)驗(yan)中(zhong)，對(dui)(dui)于達到(dao)溶解度(du)極限或需要對(dui)(dui)相(xiang)關濃度(du)范(fan)(fan)圍進(jin)行解析以確定最佳(jia)參(can)(can)數的情況(kuang)，定義了(le)替代濃度(du)范(fan)(fan)圍。樣品靜置(zhi)10分(fen)鐘，以便在(zai)(zai)(zai)液體中(zhong)平(ping)衡(heng)?空中(zhong)接口。表(biao)面(mian)壓力分(fen)布在(zai)(zai)(zai)張力計(ji)（MultiPi WS1，Kibron Inc.，芬蘭赫爾辛基）上進(jin)行，通(tong)過之前的測(ce)量（72.8 mN/m）對(dui)(dui)50μL等份樣品進(jin)行校準。通(tong)過對(dui)(dui)生成(cheng)的等溫線進(jin)行曲線擬合確定表(biao)面(mian)活性(xing)參(can)(can)數，并根據經典的空氣吉布斯(si)熱力學理論進(jin)行計(ji)算?水(shui)里(li)，臉上。主要導出參(can)(can)數如(ru)下。（i）考：空氣?水(shui)分(fen)配系數，來(lai)自等式2

式中(zhong)，π對應于(yu)表面(mian)壓力，C對應于(yu)化(hua)合物濃(nong)度(du)。（ii）CMC：對應于(yu)最(zui)大表面(mian)壓力下平(ping)臺截(jie)距和(he)曲線(xian)外推斜率(lv)的(de)臨界膠束濃(nong)度(du)(?π/?lnc）處(chu)于(yu)拐點（圖3）。（iii）ΔΔGam：式3中(zhong)的(de)兩親(qin)性

式中(zhong)，R是理想(xiang)氣體(ti)常數，T是以(yi)開爾文為單位(wei)的(de)溫度。（iv）As：界面面積，來自等式4

其(qi)中NA是(shi)阿伏伽德羅的數字。

電離研(yan)究。電離常數(shu)（PKA）是通過PrimuleSGA儀器（天狼星分析(xi)儀器有(you)限公司，森林街，英國(guo)）分光光度法獲得(de)的(de)。在室溫下(xia)，以恒(heng)定(ding)流(liu)速將試驗品的(de)水溶液(ye)注入流(liu)動的(de)pH梯度中。監測(ce)化合(he)(he)物(wu)紫外吸光度的(de)變(bian)化，作為pH梯度的(de)函(han)數(shu)，并在紫外波(bo)長處測(ce)定(ding)電離常數(shu)，其(qi)中化合(he)(he)物(wu)吸光度的(de)變(bian)化率達到最(zui)大值。通過按比(bi)例(li)混合(he)(he)兩種流(liu)動緩沖液(ye)（含10%/vol甲(jia)醇），建立pH梯度。緩沖液(ye)是弱酸(suan)和(he)弱堿的(de)混合(he)(he)物(wu)，在240 nm波(bo)長以上吸收不明(ming)顯。對于電離常數(shu)未經實驗測(ce)定(ding)的(de)化合(he)(he)物(wu)，pKa是使用現有(you)的(de)公共和(he)羅氏專利化合(he)(he)物(wu)訓(xun)練的(de)市售(shou)Moka-in-silico模型計算的(de)。16

親脂性（logD）測定(ding)。在分(fen)配實(shi)驗之(zhi)前，在室(shi)溫下(xia)，辛(xin)醇(chun)和(he)pH為(wei)(wei)6.5的(de)(de)25 mM磷酸(suan)(suan)鹽(yan)緩沖液(ye)相互飽(bao)和(he)。將化合物作為(wei)(wei)10mM的(de)(de)DMSO儲備(bei)溶液(ye)添加到(dao)辛(xin)醇(chun)飽(bao)和(he)磷酸(suan)(suan)鹽(yan)緩沖液(ye)中(zhong)(zhong)，得(de)到(dao)100μM的(de)(de)樣品溶液(ye)。然后(hou)，將1.2 mL溶液(ye)通過密理博(bo)96深井(jing)(jing)過濾(lv)器（密理博(bo)，達姆施塔特(te)，德國）過濾(lv)到(dao)Nunc 96深井(jing)(jing)板（Nalge Nunc International，Rochester，NY）中(zhong)(zhong)，并(bing)用(yong)200μL辛(xin)醇(chun)飽(bao)和(he)磷酸(suan)(suan)鹽(yan)緩沖液(ye)稀釋(shi)至最終1.4 mL體(ti)(ti)積(ji)。將等分(fen)濾(lv)液(ye)（Vaq=150μL）轉移(yi)至羅氏(shi)公司生(sheng)產的(de)(de)Teflon 96孔板上，并(bing)通過自動液(ye)體(ti)(ti)處理系(xi)統覆蓋DIF管（瑞(rui)士Rapperswill Weidmann Plastics Technology AG），預涂兩(liang)種(zhong)不同體(ti)(ti)積(ji)的(de)(de)辛(xin)醇(chun)（Voct=1和(he)15μL；每(mei)種(zhong)體(ti)(ti)積(ji)n=3）（Bio-RAPTR FRD，Beckmann Coulter，Brea，CA）或(huo)不含(han)辛(xin)醇(chun)作為(wei)(wei)初(chu)始(shi)含(han)水(shui)化合物濃度的(de)(de)參考（每(mei)種(zhong)化合物n=2；Caq 0）。將分(fen)析(xi)試劑(ji)盒密封并(bing)在室(shi)溫下(xia)搖動過夜，直到(dao)達到(dao)分(fen)布平衡。從特(te)氟隆板頂(ding)部拆卸DIF管后(hou)，使(shi)用(yong)LC測定(ding)平衡時（Caqeq）和(he)初(chu)始(shi)條件(jian)下(xia)（Caq0）水(shui)相中(zhong)(zhong)的(de)(de)化合物濃度?紫外線?MS，如(ru)下(xia)所述。

根據公式(shi)5計算分配系數(shu)logD

式中，Vaq和Voct分別(bie)是培(pei)養板上的飽和水相和辛醇(chun)相體積。

對于(yu)一些pH值(zhi)為(wei)(wei)6.5的(de)實(shi)(shi)驗數據不可用(yong)(yong)的(de)化合物，使(shi)(shi)用(yong)(yong)上述相同方法在(zai)pH值(zhi)為(wei)(wei)7.4時測量(liang)logD，或(huo)使(shi)(shi)用(yong)(yong)計算程序Kow_clogP17或(huo)參考文獻數據預測logP值(zhi)。在(zai)這種情(qing)況下，使(shi)(shi)用(yong)(yong)ADMET預測器(qi)logD vs pH模型(xing)版本6.1（加利福尼亞州蘭開(kai)斯(si)特Simulations Plus，Inc.，Lancaster），基于(yu)參考文獻18中(zhong)開(kai)發的(de)模型(xing)，將logD或(huo)logP值(zhi)和表2中(zhong)列出的(de)pKa數據作為(wei)(wei)輸(shu)入參數，實(shi)(shi)現了pH值(zhi)為(wei)(wei)6.5時logD的(de)外推。

表2。測定了(le)51種化合物的(de)表面張力特性(xing)

高效(xiao)液相(xiang)色譜法分析(xi)化(hua)合物濃度(du)(du)(du)?紫外(wai)線?MS樣(yang)(yang)品(pin)(pin)在(zai)安捷倫(lun)1260 Infinity（溶(rong)(rong)解度(du)(du)(du)樣(yang)(yang)品(pin)(pin)）或(huo)安捷倫(lun)1290 Infinity（logD樣(yang)(yang)品(pin)(pin)）HPLC-MS系(xi)統（安捷倫(lun)科技，加(jia)利福尼(ni)亞州圣(sheng)克拉(la)(la)拉(la)(la)）中(zhong)進行分析(xi)，該系(xi)統配備DAD檢測(ce)(ce)器和API單四重質譜儀(yi)（安捷倫(lun)6140，加(jia)利福尼(ni)亞州圣(sheng)克拉(la)(la)拉(la)(la)）。將樣(yang)(yang)品(pin)(pin)注入(ru)(ru)Kinetex XB 2.6μm、2.1×50 mm（溶(rong)(rong)解度(du)(du)(du)樣(yang)(yang)品(pin)(pin)）或(huo)Kinetex XB 1.7μm、2.1×30 mm（logD樣(yang)(yang)品(pin)(pin)）分析(xi)柱（Phenomenex，Torrance，CA），在(zai)60°C下操作。流(liu)(liu)(liu)動相(xiang)由a（水）和B（乙腈(jing)）組成，均含有0.1%體積的甲(jia)酸。使用通(tong)(tong)用快速(su)梯(ti)(ti)度(du)(du)(du)，以1.5 mL/min（溶(rong)(rong)解度(du)(du)(du)樣(yang)(yang)品(pin)(pin)）或(huo)1.0 mL/min（logD樣(yang)(yang)品(pin)(pin)）的流(liu)(liu)(liu)速(su)進行梯(ti)(ti)度(du)(du)(du)洗(xi)脫(tuo)。通(tong)(tong)過(guo)DAD檢測(ce)(ce)器后，將洗(xi)脫(tuo)液引入(ru)(ru)電噴霧界面(mian)，保持(chi)以下源設置：毛細管(guan)電壓(ya)+3.5 kV，干(gan)燥氣體流(liu)(liu)(liu)量（N2）13 L/min，霧化(hua)器壓(ya)力60 psig，干(gan)燥氣體溫度(du)(du)(du)350°C。偽分子離子強度(du)(du)(du)積分，[M+H]+，在(zai)單反應監測(ce)(ce)模式(shi)（SRM）下獲取。對于logD樣(yang)(yang)品(pin)(pin)，通(tong)(tong)過(guo)注入(ru)(ru)1、3和5μL對照溶(rong)(rong)液完(wan)成MS數據的內部校準。如果UV靈敏度(du)(du)(du)足夠，則使用適當波(bo)長(chang)處(chu)的峰面(mian)積進行計算。