摘要

我們利用表面(mian)(mian)敏感(gan)技術振(zhen)動SUM頻(pin)率(lv)產生光譜結合表面(mian)(mian)壓(ya)(ya)力測量，對水中(zhong)(zhong)自組裝的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)偶(ou)(ou)氮(dan)苯(ben)基光開(kai)關脂(zhi)(zhi)質(zhi)單層進行了(le)分(fen)子(zi)深入研究(jiu)。光脂(zhi)(zhi)質(zhi)可經歷波長依賴的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)、光觸(chu)發的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)順(shun)(shun)/反和(he)順(shun)(shun)/反異構化，允(yun)許可逆控制表面(mian)(mian)壓(ya)(ya)力和(he)單層中(zhong)(zhong)脂(zhi)(zhi)質(zhi)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)分(fen)子(zi)順(shun)(shun)序(xu)(xu)。如(ru)果光開(kai)關脂(zhi)(zhi)質(zhi)與傳統磷(lin)脂(zhi)(zhi)（如(ru)1,2-二棕櫚酰-sn-甘油(you)-3-磷(lin)酸膽堿（DPPC））嵌在一層中(zhong)(zhong)，我們表明，在偶(ou)(ou)氮(dan)苯(ben)基脂(zhi)(zhi)質(zhi)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)兩(liang)種(zhong)狀(zhuang)態(tai)之間(jian)切換會影響DPPC的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)表面(mian)(mian)壓(ya)(ya)力和(he)分(fen)子(zi)順(shun)(shun)序(xu)(xu)。值得注意的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)是，具有較(jiao)高表面(mian)(mian)壓(ya)(ya)力的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)狀(zhuang)態(tai)（順(shun)(shun)式狀(zhuang)態(tai)）以較(jiao)低的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)分(fen)子(zi)有序(xu)(xu)度為特征。這(zhe)個違反直覺(jue)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)結果可以通過注意到(dao)順(shun)(shun)式狀(zhuang)態(tai)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)偶(ou)(ou)氮(dan)苯(ben)部(bu)分(fen)具有更高的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)偶(ou)(ou)極矩(ju)來理解，因此(ci)有利于(yu)與水的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)相互作(zuo)(zuo)用。該系(xi)統的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)表面(mian)(mian)自由(you)能通過與界面(mian)(mian)上的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)脂(zhi)(zhi)質(zhi)頭(tou)基的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)靜(jing)電(dian)相互作(zuo)(zuo)用而降低（表面(mian)(mian)壓(ya)(ya)力增(zeng)加），導致脂(zhi)(zhi)質(zhi)尾與順(shun)(shun)式偶(ou)(ou)氮(dan)苯(ben)形成環(huan)。這(zhe)種(zhong)光開(kai)關脂(zhi)(zhi)質(zhi)尾部(bu)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)紊(wen)亂擾亂了(le)DPPC的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)順(shun)(shun)序(xu)(xu)。

導言

偶氮苯(ben)基表(biao)面(mian)(mian)活(huo)(huo)性劑(ji)分子(zi)的(de)自(zi)組(zu)裝(zhuang)單分子(zi)膜是一(yi)種獨特(te)的(de)光開(kai)(kai)(kai)關(guan)界面(mian)(mian)，在(zai)納米技術中具有潛在(zai)的(de)傳感器應用前景。1-3波長(chang)約400 nm的(de)光在(zai)順(shun)式(shi)和(he)反式(shi)狀態之間切換表(biao)面(mian)(mian)活(huo)(huo)性劑(ji)可(ke)導致表(biao)面(mian)(mian)壓力(li)、表(biao)面(mian)(mian)電位、囊(nang)泡穩定性和(he)臨界膠束濃度的(de)顯著差異。2,4-7還(huan)表(biao)明(ming)，將(jiang)偶氮苯(ben)基表(biao)面(mian)(mian)活(huo)(huo)性劑(ji)嵌入人工膜中，可(ke)以對機(ji)(ji)械敏(min)感膜通道蛋白的(de)活(huo)(huo)性進行外(wai)部光學控制。8因此，了解(jie)開(kai)(kai)(kai)關(guan)過程背(bei)后(hou)的(de)分子(zi)細(xi)節對于開(kai)(kai)(kai)發人工門控機(ji)(ji)制也很(hen)(hen)重要，這(zhe)可(ke)能(neng)最終用于生物學和(he)醫學應用。9盡管開(kai)(kai)(kai)關(guan)過程很(hen)(hen)重要，但在(zai)分子(zi)水平上缺乏對開(kai)(kai)(kai)關(guan)過程的(de)詳(xiang)細(xi)理解(jie)。5.

圖1：。順(shun)式(shi)和(he)(he)反式(shi)構型的(de)光(guang)(guang)開關脂質(zhi)DT Azo-5P和(he)(he)d75 DPPC的(de)分子結構。右上角的(de)插(cha)圖顯示了CHCl3中DT Azo-5P的(de)紫(zi)外/可(ke)見(jian)光(guang)(guang)譜(～在370 nm（順(shun)式(shi)）和(he)(he)450 nm（反式(shi)）下(xia)輻(fu)照約10 s后，使(shi)用7μM，1 cm反應(ying)杯）。

在(zai)(zai)(zai)此，我(wo)們(men)研究(jiu)(jiu)了光(guang)(guang)(guang)開關脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)(zhi)DT Azo-5P（圖(tu)1）的(de)(de)(de)(de)(de)單(dan)分(fen)子(zi)(zi)(zi)膜，該(gai)單(dan)分(fen)子(zi)(zi)(zi)膜是(shi)(shi)純的(de)(de)(de)(de)(de)，并與脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)(zhi)1,2-二棕(zong)櫚(lv)酰-sn-甘油(you)-3-磷(lin)酸膽堿（DPPC）混合(he)。如圖(tu)1中(zhong)的(de)(de)(de)(de)(de)紫外(wai)/可(ke)(ke)見(jian)光(guang)(guang)(guang)譜所示，光(guang)(guang)(guang)活性脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)(zhi)可(ke)(ke)分(fen)別在(zai)(zai)(zai)370 nm和(he)(he)450 nm的(de)(de)(de)(de)(de)光(guang)(guang)(guang)照(zhao)下(xia)從其(qi)反式狀態(tai)切換到順式狀態(tai)并返(fan)回(hui)。我(wo)們(men)將表(biao)面(mian)壓力(li)測量與無(wu)標簽、寬帶振動(dong)(dong)和(he)(he)頻(pin)(pin)產(chan)生(sheng)（VSFG）光(guang)(guang)(guang)譜相結合(he)。這(zhe)些技術(shu)使(shi)我(wo)們(men)能(neng)夠研究(jiu)(jiu)空(kong)氣-水界(jie)面(mian)上(shang)的(de)(de)(de)(de)(de)脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)(zhi)分(fen)子(zi)(zi)(zi)單(dan)層。可(ke)(ke)以(yi)獲得(de)有關脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)類與水分(fen)子(zi)(zi)(zi)相互作用的(de)(de)(de)(de)(de)信息(xi)以(yi)及脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)類的(de)(de)(de)(de)(de)分(fen)子(zi)(zi)(zi)結構(gou)。在(zai)(zai)(zai)非線(xian)性光(guang)(guang)(guang)學(xue)技術(shu)VSFG中(zhong)，紅(hong)外(wai)（IR）光(guang)(guang)(guang)束和(he)(he)可(ke)(ke)見(jian)光(guang)(guang)(guang)（VIS）光(guang)(guang)(guang)束在(zai)(zai)(zai)界(jie)面(mian)處組合(he)，產(chan)生(sheng)具有兩個(ge)入射光(guang)(guang)(guang)束和(he)(he)頻(pin)(pin)率的(de)(de)(de)(de)(de)信號。如果紅(hong)外(wai)與分(fen)子(zi)(zi)(zi)振動(dong)(dong)共振，信號就會強烈增強。研究(jiu)(jiu)表(biao)明，這(zhe)種通過(guo)分(fen)子(zi)(zi)(zi)振動(dong)(dong)的(de)(de)(de)(de)(de)技術(shu)可(ke)(ke)以(yi)提(ti)供(gong)有關脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)類分(fen)子(zi)(zi)(zi)構(gou)象和(he)(he)取向的(de)(de)(de)(de)(de)信息(xi)。11-18和(he)(he)頻(pin)(pin)產(chan)生(sheng)在(zai)(zai)(zai)中(zhong)心對(dui)稱(cheng)介質(zhi)(zhi)(zhi)中(zhong)是(shi)(shi)被禁(jin)止的(de)(de)(de)(de)(de)，因為(wei)(wei)它是(shi)(shi)一個(ge)二階(jie)非線(xian)性光(guang)(guang)(guang)學(xue)過(guo)程(cheng)。19因此，該(gai)技術(shu)對(dui)中(zhong)心對(dui)稱(cheng)材(cai)料(liao)（例如水表(biao)面(mian)）的(de)(de)(de)(de)(de)最外(wai)表(biao)面(mian)分(fen)子(zi)(zi)(zi)層敏感。相反，缺少(shao)信號表(biao)明界(jie)面(mian)上(shang)的(de)(de)(de)(de)(de)材(cai)料(liao)或分(fen)子(zi)(zi)(zi)基(ji)團是(shi)(shi)中(zhong)心對(dui)稱(cheng)的(de)(de)(de)(de)(de)。對(dui)于金(jin)表(biao)面(mian)偶氮(dan)苯(ben)功能(neng)化(hua)的(de)(de)(de)(de)(de)自(zi)組裝單(dan)分(fen)子(zi)(zi)(zi)膜，SFG在(zai)(zai)(zai)確定光(guang)(guang)(guang)異構(gou)化(hua)的(de)(de)(de)(de)(de)截面(mian)和(he)(he)機理(li)方面(mian)非常有用。得(de)出的(de)(de)(de)(de)(de)結論是(shi)(shi)，光(guang)(guang)(guang)異構(gou)化(hua)是(shi)(shi)由(you)直接(jie)電子(zi)(zi)(zi)激發(fa)驅動(dong)(dong)的(de)(de)(de)(de)(de)，類似于液(ye)相中(zhong)的(de)(de)(de)(de)(de)偶氮(dan)苯(ben)。3我(wo)們(men)將表(biao)明，通過(guo)切換光(guang)(guang)(guang)脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)，可(ke)(ke)以(yi)可(ke)(ke)逆地控制脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)(zhi)的(de)(de)(de)(de)(de)表(biao)面(mian)壓力(li)和(he)(he)分(fen)子(zi)(zi)(zi)順序(xu)。在(zai)(zai)(zai)同時含(han)有光(guang)(guang)(guang)脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)和(he)(he)脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)(zhi)DPPC的(de)(de)(de)(de)(de)混合(he)單(dan)分(fen)子(zi)(zi)(zi)膜中(zhong)，我(wo)們(men)可(ke)(ke)以(yi)通過(guo)光(guang)(guang)(guang)學(xue)切換偶氮(dan)苯(ben)基(ji)脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)(zhi)來控制DPPC的(de)(de)(de)(de)(de)順序(xu)。這(zhe)為(wei)(wei)體外(wai)控制脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)(zhi)-脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)(zhi)相互作用提(ti)供(gong)了一種新的(de)(de)(de)(de)(de)手段。

實驗

樣品前面已(yi)經描述了含偶(ou)氮(dan)苯的(de)(de)(de)二烷基磷(lin)酸酯(zhi)DT Azo-3P、DT Azo-5P和(he)(he)(he)DT Azo-9P的(de)(de)(de)合(he)(he)成(cheng)。在(zai)(zai)(zai)VSFG實(shi)驗(yan)中(zhong)(zhong)，將20層DT Azo-5P（或-3P和(he)(he)(he)-9P）單(dan)分(fen)子(zi)(zi)(zi)(zi)膜從(cong)(cong)0.6 mM氯(lv)仿溶液中(zhong)(zhong)擴(kuo)散到空(kong)氣H2O（微孔，18 MΩ/cm-1）界面上(shang)，在(zai)(zai)(zai)自(zi)制的(de)(de)(de)7×7 cm2槽(cao)中(zhong)(zhong)進行(xing)VSFG實(shi)驗(yan)，并在(zai)(zai)(zai)6×23 cm2的(de)(de)(de)商用(yong)金屬朗繆爾槽(cao)（Kibron Inc.，芬蘭）中(zhong)(zhong)進行(xing)等溫線(xian)測量(liang)。正常DPPC和(he)(he)(he)d75 DPPC（圖1）從(cong)(cong)Avanti極(ji)性脂(zhi)質(zhi)中(zhong)(zhong)獲得，均溶于(yu)(yu)氯(lv)仿中(zhong)(zhong)，濃度約(yue)為(wei)(wei)0.7 mM。兩(liang)種(zhong)脂(zhi)類的(de)(de)(de)混(hun)合(he)(he)物是(shi)通(tong)過(guo)在(zai)(zai)(zai)表面攤鋪之前混(hun)合(he)(he)每種(zhong)化(hua)合(he)(he)物的(de)(de)(de)溶液制成(cheng)的(de)(de)(de)。每個(ge)分(fen)子(zi)(zi)(zi)(zi)的(de)(de)(de)面積由(you)散布在(zai)(zai)(zai)水面上(shang)的(de)(de)(de)0.5μL液滴的(de)(de)(de)數(shu)量(liang)控制。使用(yong)中(zhong)(zhong)心波長(chang)為(wei)(wei)370和(he)(he)(he)450 nm、功率分(fen)別(bie)為(wei)(wei)8.3和(he)(he)(he)21 mW的(de)(de)(de)二極(ji)管(guan)在(zai)(zai)(zai)光(guang)(guang)開關脂(zhi)質(zhi)的(de)(de)(de)兩(liang)種(zhong)構(gou)(gou)象之間(jian)進行(xing)切換(huan)，如圖1所示。我(wo)(wo)們將370 nm和(he)(he)(he)450 nm輻照(zhao)后的(de)(de)(de)系(xi)統分(fen)別(bie)稱為(wei)(wei)“順(shun)(shun)式(shi)(shi)(shi)(shi)”和(he)(he)(he)“反(fan)(fan)(fan)式(shi)(shi)(shi)(shi)”狀(zhuang)(zhuang)(zhuang)(zhuang)(zhuang)態(tai)(tai)，盡管(guan)總是(shi)存(cun)在(zai)(zai)(zai)構(gou)(gou)象的(de)(de)(de)混(hun)合(he)(he)物。由(you)于(yu)(yu)順(shun)(shun)式(shi)(shi)(shi)(shi)和(he)(he)(he)反(fan)(fan)(fan)式(shi)(shi)(shi)(shi)之間(jian)的(de)(de)(de)吸(xi)(xi)收(shou)差(cha)在(zai)(zai)(zai)370nm左右非常大，因此可(ke)以獲得相對純凈的(de)(de)(de)順(shun)(shun)式(shi)(shi)(shi)(shi)狀(zhuang)(zhuang)(zhuang)(zhuang)(zhuang)態(tai)(tai)。如果(guo)(guo)假設順(shun)(shun)式(shi)(shi)(shi)(shi)狀(zhuang)(zhuang)(zhuang)(zhuang)(zhuang)態(tai)(tai)在(zai)(zai)(zai)390 nm處的(de)(de)(de)吸(xi)(xi)光(guang)(guang)度為(wei)(wei)零（圖1），則(ze)該波長(chang)處的(de)(de)(de)吸(xi)(xi)光(guang)(guang)度較小(xiao)(xiao)是(shi)由(you)順(shun)(shun)式(shi)(shi)(shi)(shi)狀(zhuang)(zhuang)(zhuang)(zhuang)(zhuang)態(tai)(tai)中(zhong)(zhong)存(cun)在(zai)(zai)(zai)的(de)(de)(de)反(fan)(fan)(fan)式(shi)(shi)(shi)(shi)狀(zhuang)(zhuang)(zhuang)(zhuang)(zhuang)態(tai)(tai)引起的(de)(de)(de)。由(you)于(yu)(yu)390 nm處的(de)(de)(de)吸(xi)(xi)光(guang)(guang)度是(shi)完(wan)全(quan)熱(re)平衡跨光(guang)(guang)譜的(de)(de)(de)5%，我(wo)(wo)們得出結(jie)論，最多有(you)(you)5%的(de)(de)(de)跨分(fen)子(zi)(zi)(zi)(zi)對整個(ge)吸(xi)(xi)收(shou)光(guang)(guang)譜有(you)(you)貢(gong)獻(xian)。如果(guo)(guo)順(shun)(shun)式(shi)(shi)(shi)(shi)狀(zhuang)(zhuang)(zhuang)(zhuang)(zhuang)態(tai)(tai)在(zai)(zai)(zai)390 nm處有(you)(you)一個(ge)很小(xiao)(xiao)的(de)(de)(de)吸(xi)(xi)收(shou)，則(ze)存(cun)在(zai)(zai)(zai)的(de)(de)(de)反(fan)(fan)(fan)式(shi)(shi)(shi)(shi)分(fen)子(zi)(zi)(zi)(zi)分(fen)數(shu)甚至(zhi)低于(yu)(yu)這5%。然而(er)，450 nm處順(shun)(shun)式(shi)(shi)(shi)(shi)構(gou)(gou)象和(he)(he)(he)反(fan)(fan)(fan)式(shi)(shi)(shi)(shi)構(gou)(gou)象之間(jian)的(de)(de)(de)吸(xi)(xi)收(shou)對比度并沒(mei)有(you)(you)那么(me)大，導致一些順(shun)(shun)式(shi)(shi)(shi)(shi)分(fen)子(zi)(zi)(zi)(zi)出現在(zai)(zai)(zai)，我(wo)(wo)們這里(li)稱之為(wei)(wei)反(fan)(fan)(fan)式(shi)(shi)(shi)(shi)狀(zhuang)(zhuang)(zhuang)(zhuang)(zhuang)態(tai)(tai)。反(fan)(fan)(fan)式(shi)(shi)(shi)(shi)狀(zhuang)(zhuang)(zhuang)(zhuang)(zhuang)態(tai)(tai)將被(bei)順(shun)(shun)式(shi)(shi)(shi)(shi)分(fen)子(zi)(zi)(zi)(zi)“污(wu)染(ran)”。由(you)于(yu)(yu)反(fan)(fan)(fan)式(shi)(shi)(shi)(shi)狀(zhuang)(zhuang)(zhuang)(zhuang)(zhuang)態(tai)(tai)對熱(re)有(you)(you)利，輻照(zhao)平衡將更(geng)多地(di)轉移到反(fan)(fan)(fan)式(shi)(shi)(shi)(shi)狀(zhuang)(zhuang)(zhuang)(zhuang)(zhuang)態(tai)(tai)，從(cong)(cong)而(er)降低順(shun)(shun)式(shi)(shi)(shi)(shi)污(wu)染(ran)。通(tong)過(guo)將完(wan)全(quan)熱(re)平衡反(fan)(fan)(fan)式(shi)(shi)(shi)(shi)態(tai)(tai)的(de)(de)(de)UVvis吸(xi)(xi)收(shou)光(guang)(guang)譜與450 nm輻照(zhao)半(ban)分(fen)鐘后的(de)(de)(de)光(guang)(guang)譜進行(xing)比較，可(ke)以從(cong)(cong)觀察中(zhong)(zhong)提取順(shun)(shun)式(shi)(shi)(shi)(shi)污(wu)染(ran)的(de)(de)(de)量(liang)，即后一個(ge)光(guang)(guang)譜可(ke)以由(you)完(wan)全(quan)熱(re)平衡反(fan)(fan)(fan)式(shi)(shi)(shi)(shi)光(guang)(guang)譜的(de)(de)(de)0.75倍和(he)(he)(he)順(shun)(shun)式(shi)(shi)(shi)(shi)光(guang)(guang)譜的(de)(de)(de)0.25倍構(gou)(gou)成(cheng)。由(you)此我(wo)(wo)們得出結(jie)論，反(fan)(fan)(fan)式(shi)(shi)(shi)(shi)狀(zhuang)(zhuang)(zhuang)(zhuang)(zhuang)態(tai)(tai)中(zhong)(zhong)最多存(cun)在(zai)(zai)(zai)25%的(de)(de)(de)順(shun)(shun)式(shi)(shi)(shi)(shi)“污(wu)染(ran)”。如果(guo)(guo)樣品保持(chi)在(zai)(zai)(zai)黑暗中(zhong)(zhong)，順(shun)(shun)式(shi)(shi)(shi)(shi)狀(zhuang)(zhuang)(zhuang)(zhuang)(zhuang)態(tai)(tai)的(de)(de)(de)UV和(he)(he)(he)SFG光(guang)(guang)譜在(zai)(zai)(zai)30分(fen)鐘內(nei)不會發生(sheng)變化(hua)：顯然，從(cong)(cong)順(shun)(shun)式(shi)(shi)(shi)(shi)到反(fan)(fan)(fan)式(shi)(shi)(shi)(shi)的(de)(de)(de)熱(re)轉變很慢(man)。transcis和(he)(he)(he)順(shun)(shun)-反(fan)(fan)(fan)異構(gou)(gou)化(hua)的(de)(de)(de)量(liang)子(zi)(zi)(zi)(zi)產率都(dou)與波長(chang)有(you)(you)關，通(tong)常達到數(shu)十%。（參(can)見(jian)參(can)考文(wen)獻(xian)21）。

設置。表(biao)面(mian)壓力測(ce)量。使用商用張力計（芬蘭Kibron）以針為(wei)探針測(ce)量表(biao)面(mian)壓力。在壓縮等溫線(xian)實(shi)驗中(zhong)(zhong)，該層以～7?2/分子/分鐘(zhong)，帶有(you)兩個移動屏(ping)障。在等溫線(xian)實(shi)驗中(zhong)(zhong)，用370 nm的(de)光照射樣品約60 s，然后(hou)將其(qi)攤鋪在表(biao)面(mian)，制備出(chu)分子的(de)順式(shi)狀態。

振(zhen)動和(he)頻發生光(guang)(guang)(guang)譜(pu)(pu)學。使用(yong)(yong)可見光(guang)(guang)(guang)脈沖(chong)(chong)（12540 cm-1，～20μJ，帶(dai)(dai)寬17 cm-1，半最大(da)全寬，fwhm），與寬帶(dai)(dai)紅(hong)外脈沖(chong)(chong)重(zhong)疊（中(zhong)心為(wei)2160或(huo)2960 cm-1，分(fen)(fen)別(bie)研究C-D和(he)C-H拉伸模(mo)式，脈沖(chong)(chong)能量(liang)為(wei)～5μJ，半高寬帶(dai)(dai)寬為(wei)150 cm-1）。這(zhe)些紅(hong)外脈沖(chong)(chong)是由OPG/OPA（TOPAS，光(guang)(guang)(guang)轉換）產(chan)生的(de)(de)，OPG/OPA由～100 fs放大(da)鈦寶(bao)石激光(guang)(guang)(guang)系(xi)(xi)統(tong)（Legend，Coherent，Inc.）。窄帶(dai)(dai)可見光(guang)(guang)(guang)脈沖(chong)(chong)提供了(le)實(shi)驗的(de)(de)光(guang)(guang)(guang)譜(pu)(pu)分(fen)(fen)辨率，而寬帶(dai)(dai)紅(hong)外脈沖(chong)(chong)允許(xu)同時檢(jian)測多種振(zhen)動模(mo)式。10,22為(wei)了(le)校正(zheng)紅(hong)外功率的(de)(de)頻率依賴性(xing)，VSFG光(guang)(guang)(guang)譜(pu)(pu)通(tong)過z切石英的(de)(de)參考(kao)光(guang)(guang)(guang)譜(pu)(pu)進(jin)行(xing)歸一(yi)化(hua)。可見光(guang)(guang)(guang)和(he)紅(hong)外光(guang)(guang)(guang)束(shu)(shu)相對于表(biao)面法線的(de)(de)入射(she)角分(fen)(fen)別(bie)為(wei)35
和(he)40
。兩條光(guang)(guang)(guang)束(shu)(shu)都聚焦到大(da)約100μm的(de)(de)束(shu)(shu)腰。可見光(guang)(guang)(guang)束(shu)(shu)的(de)(de)注量(liang)足(zu)夠低，可以避免偶(ou)氮苯部分(fen)(fen)的(de)(de)雙光(guang)(guang)(guang)子異構化(hua)，這(zhe)是通(tong)過比較輻照(zhao)前(qian)后(hou)的(de)(de)光(guang)(guang)(guang)譜(pu)(pu)來檢(jian)查的(de)(de)。VSFG光(guang)(guang)(guang)通(tong)過單(dan)色儀進(jin)行(xing)光(guang)(guang)(guang)譜(pu)(pu)分(fen)(fen)散(san)，并通(tong)過電(dian)子倍增(zeng)電(dian)荷耦合(he)器件(jian)(jian)（EMCCD和(he)或(huo)技術）進(jin)行(xing)檢(jian)測。除(chu)非另有說明，否則在(zai)s極(ji)(ji)化(hua)VSFG、s極(ji)(ji)化(hua)VIS和(he)p極(ji)(ji)化(hua)IR（SSP）條件(jian)(jian)下(xia)，純DT Azo-5P實(shi)驗在(zai)60 s內記錄VSFG光(guang)(guang)(guang)譜(pu)(pu)，混合(he)物在(zai)180 s內記錄VSFG光(guang)(guang)(guang)譜(pu)(pu)。在(zai)我們(men)交替使用(yong)(yong)順(shun)式和(he)反(fan)式狀態的(de)(de)實(shi)驗中(zhong)，二(er)極(ji)(ji)管(guan)從上方照(zhao)射(she)系(xi)(xi)統(tong)。二(er)極(ji)(ji)管(guan)發出(chu)的(de)(de)光(guang)(guang)(guang)沒有聚焦，幾乎照(zhao)射(she)了(le)整個(ge)槽，因此，由于脂(zhi)質(zhi)從照(zhao)射(she)區域外擴散(san)到激光(guang)(guang)(guang)焦點(dian)而導致(zhi)的(de)(de)信號失真不是一(yi)個(ge)重(zhong)要因素。壓(ya)力計和(he)激光(guang)(guang)(guang)焦點(dian)均位于二(er)極(ji)(ji)管(guan)照(zhao)射(she)區域內。我們(men)始終照(zhao)射(she)至(zhi)少(shao)100 s（分(fen)(fen)別(bie)對應于370和(he)450 nm的(de)(de)1.5
1018和(he)4.8
1018光(guang)(guang)(guang)子），以獲得(de)最大(da)轉化(hua)率，這(zhe)從動力學研究中(zhong)可以明顯看出(chu)：照(zhao)射(she)超過100 s不會再改變(bian)壓(ya)力和(he)VSFG信號。