材料(liao)和方法

2.1. 酒樣

分析了 20 種(zhong)單品(pin)種(zhong)、白葡萄(tao)酒(jiu)和(he)紅(hong)葡萄(tao)酒(jiu)。 他們(men)包(bao)括來自白葡萄(tao)品(pin)種(zhong)的樣(yang)本：Tsaousi（W1、W2、W3、W4、W5）、Robola（W6、W7、W8）、Lagorthi（W9、W10）、Sideritis（W11、W12）、Tourkopoula（W13） ) 和(he)紅(hong)色(se) V. vinifera 葡萄(tao)品(pin)種(zhong)：Augoustiatis (R1, R2)、Refosco Rosso (R3, R4)、Mavrodafni (R5, R6)、Vertzami (R7)，栽(zai)培于希臘(la)西部。 相(xiang)應地，葡萄(tao)酒(jiu)是使用(yong)相(xiang)同的釀(niang)造協議生產的，白色(se)或紅(hong)色(se)。

2.2. 其他材料

牛血清(qing)白(bai)蛋白(bai) (BSA) 購(gou)自(zi)(zi)(zi)(zi) Acros Organics (NJ, USA)，L-(+)-酒(jiu)石酸(suan)(suan)(suan)購(gou)自(zi)(zi)(zi)(zi) Riedel-de Hae¨n (Seelze, Germany)，蘋果酸(suan)(suan)(suan)、乳酸(suan)(suan)(suan)和(he)(he)(he)(he)檸檬酸(suan)(suan)(suan)購(gou)自(zi)(zi)(zi)(zi)默克 (Darmstadt) ， 德國(guo)）。 KCl、NaCl、MgCl2.6H2O、CaCl2.2H2O、甘油，以及標(biao)準化(hua)(hua)合物(wu)(wu) (+)-兒茶素(su)、沒食子(zi)酸(suan)(suan)(suan)、乙醛、乙酸(suan)(suan)(suan)乙酯、甲醇(chun)、丙醇(chun)-1、甲基-2-丙醇(chun)-1、甲基- 2-丁醇(chun)-1、甲基-3-丁醇(chun)-1 和(he)(he)(he)(he)甲基-4-戊醇(chun)-2 來(lai)(lai)(lai)自(zi)(zi)(zi)(zi) Sigma-Aldrich 化(hua)(hua)學(xue)公司（美國(guo)威(wei)斯(si)康星州）。 緩(huan)沖溶(rong)液（pH 7.00 ± 0.02 和(he)(he)(he)(he) pH 4.01 ± 0.02）來(lai)(lai)(lai)自(zi)(zi)(zi)(zi) Mettler-Toledo。 無水(shui)乙醇(chun)、甲醇(chun)（99.8%，UV-IR-HPLC）、甲酸(suan)(suan)(suan)（98%）和(he)(he)(he)(he)鹽(yan)酸(suan)(suan)(suan)（37%）來(lai)(lai)(lai)自(zi)(zi)(zi)(zi) Panreac Quimica SA（西班牙(ya)）、硝酸(suan)(suan)(suan)（65%）、磷(lin)(lin)酸(suan)(suan)(suan)（85%、 ACS-ISO)、硫酸(suan)(suan)(suan) (95–97%)、氫氧化(hua)(hua)鈉、碘 (FIXANAL)、淀粉、EDTA 和(he)(he)(he)(he)磷(lin)(lin)酸(suan)(suan)(suan)二氫鉀來(lai)(lai)(lai)自(zi)(zi)(zi)(zi) Riedel-de Haen (Seelze, Germany)。 考馬斯(si)亮藍 G250、(-)-表兒茶素(su)、阿魏酸(suan)(suan)(suan)、咖啡酸(suan)(suan)(suan)和(he)(he)(he)(he)對香豆酸(suan)(suan)(suan)來(lai)(lai)(lai)自(zi)(zi)(zi)(zi) Fluka (Buchs, Switzerland)。 花青素(su)購(gou)自(zi)(zi)(zi)(zi) Extrasynthese (Genay, France)。 葡(pu)萄籽和(he)(he)(he)(he)皮單寧（Tanipepin 和(he)(he)(he)(he) Taniraisin）的商業(ye)提取物(wu)(wu)來(lai)(lai)(lai)自(zi)(zi)(zi)(zi) Martin Vialattenologie（法國(guo)埃佩奈）。 HPLC 中使用的水(shui)由 MilliQ 水(shui)系統獲(huo)得，最(zui)小電阻為 18.2 MV cm。

2.3. 模型解決方案(an)

制(zhi)備(bei)濃度為(wei) 8% 至 16% (v/v) 的(de)(de)乙(yi)醇水溶液(ye)，以(yi)匹配葡(pu)(pu)萄酒(jiu)范圍(wei)。 三(san)組含(han)有 BSA 蛋白或(huo)商業(ye)單寧的(de)(de)溶液(ye)制(zhi)備(bei)在：(a) 水中，(b) 12% (v/v) 乙(yi)醇溶液(ye)和 (c) 模型葡(pu)(pu)萄酒(jiu)溶液(ye)。 模型葡(pu)(pu)萄酒(jiu)溶液(ye)由水/乙(yi)醇混合(he)物(wu) (88:12%, v/v) 和 2 g/L 酒(jiu)石酸組成，pH 值通(tong)過添(tian)加 2 MNaOH 調節至 3.5。 研究的(de)(de)濃度為(wei) 0.025、0.100、0.250、0.500、0.750 和 1.000 克(ke)(ke) BSA/L，以(yi)及(ji) 0.1、0.5、1.0、2.0 和 4.0 克(ke)(ke)丹尼皮平或(huo)丹寧菌素/L。

2.4. 方法(fa)

2.4.1. 表面張力(li)測定(ding)

使(shi)用 Wilhelmy Constant Run 程序，通過 Wilhelmy 板法（自動(dong) KSV Sigma_70 張力計，赫(he)爾辛基，芬蘭）在 25 度(du)下進行(xing)表(biao)面張力測(ce)量。 結果表(biao)示為 mN/m，是三(san)次重(zhong)復分析的平(ping)均(jun)值。 獲得的相對(dui)標準偏差 (%) 低于(yu) 5%。

2.4.2. 分析(xi)測定

基本(ben)釀(niang)酒(jiu)(jiu)參數：乙醇含量(liang)(liang)(liang)（% vol.）、可(ke)滴(di)定(ding)酸(suan)(suan)度(du)（g 酒(jiu)(jiu)石(shi)酸(suan)(suan)/L）和揮發性(xing)酸(suan)(suan)度(du)（g 乙酸(suan)(suan)/L）、pH 值和還(huan)原糖（g/L）通過傅立葉變(bian)換確定(ding)紅(hong)外光(guang)譜 (FTIR) 技術(shu)，使(shi)用(yong) FOSS 自動分析儀（WineScanTM FT120 Basic，丹麥）。 量(liang)(liang)(liang)化基于校準(zhun)曲線，該(gai)曲線使(shi)用(yong)從大量(liang)(liang)(liang)希臘品種葡萄(tao)酒(jiu)(jiu)分析中(zhong)獲得的(de)數據建立。 根據國際葡萄(tao)與葡萄(tao)酒(jiu)(jiu)組織 (1990) 快速(su)方法(fa)測定(ding)總(zong) SO2 (mg/L)。 所有分析均一式兩份進行。 重(zhong)復性(xing)的(de)相對標(biao)準(zhun)偏差(cha) (RSD %) 低(di)于 10%。

總酚(fen)指數和單寧(ning)：總酚(fen)指數在(zai) 280 nm 處測定（Somers，1975；Sudraud，1958），而 Glories 方法（1978）用于測定單寧(ning)。 Shimadzu UV-1601 分光光度(du)計(ji)（日(ri)本京都）結(jie)合 UVPC-1601 軟件(jian)用于所(suo)有 UV-vis 吸光度(du)測量。 所(suo)有分析(xi)均一(yi)式(shi)兩份進行。 重復性的相對標(biao)準偏差 (RSD %) 低于 10%。

蛋白(bai)質：布拉德福德方(fang)法(fa)（布拉德福德，1976 年）用于測定蛋白(bai)質（Moreno-Arribas 等人(ren)，2002 年；Esteruelas 等人(ren)，2009 年）。 所(suo)有分析均一式兩份進(jin)行(xing)。 重復(fu)性(xing)的相對標準偏差 (RSD %) 低于 10%。

通過 HPLC 測(ce)定有機酸、陽離子和(he)甘油：使(shi)用 Waters HPLC 機器，該機器由(you) Waters 510 泵和(he)帶(dai)有 20 mL 定量環的(de) Rheodyne 7725i 型進樣(yang)閥(fa)組成。 在分析之前，將樣(yang)品通過 0.45 Millipore 過濾器過濾并通過 Sep-Pak C18 小柱（Waters，美(mei)國）進行純化。

酒石酸、蘋果酸、乳酸和檸檬酸的(de)分(fen)離在(zai) 250 mm ? 4.6 毫(hao)米內徑，5 毫(hao)米； PrevailTM Organic Acid column (Alltech Associates, Inc., Deerfield, USA) 根據 OIV (1990)。 對(dui)于(yu)檢(jian)測，使(shi)用(yong)設置為 210 nm 的(de) Waters 996 光電二(er)極管陣列(lie)檢(jian)測器。 洗脫(tuo)系統由 25 mM KH2PO4 溶液（pH 2.5）組成(cheng)； 流速為 1.5 mL/min，進樣量為 20 mL。 四(si)種有機酸的(de)七(qi)點校準曲線用(yong)于(yu)定量。

鉀、鈉、鎂和鈣的(de)分離在 150 mm ? 3.9 毫米內(nei)徑，5 毫米； IC-Pak Cation M/D 柱（Waters，美國(guo)），根據 Theodoridis (1997) 的(de)方法在等度條(tiao)件下進(jin)(jin)行。 檢(jian)測(ce)(ce)使用 Waters 431 電導檢(jian)測(ce)(ce)器。 洗(xi)脫(tuo)系統由 0.1 mM EDTA 和 3 mM HNO3 溶(rong)液組成(cheng)。 流速為 1 mL/min，進(jin)(jin)樣體積為 20 mL。 四種陽離子的(de)七點校準(zhun)曲線用于定(ding)量。

甘(gan)油的分離在(zai) 150 mm * 7.8 mm id, 7 mm 上進(jin)行； 根據(ju) Zoecklein 等人所述的方法，IC-PakTM 離子排阻柱（Waters，美國）在(zai) 60 ℃下(xia)恒(heng)溫。 (1995)。 對于檢(jian)測，使用 Waters 410 示(shi)差折光檢(jian)測器。 洗脫系統由等度條件(jian)下(xia)的 0.005 M H2SO4 溶液(ye)組成(cheng)。 流速為 0.5 mL/min，進(jin)樣(yang)體積(ji)為 20 mL。 使用甘(gan)油標(biao)準(zhun)溶液(ye)的七點校準(zhun)曲(qu)線進(jin)行定量。

所(suo)有(you)分析(xi)(xi)均一(yi)式兩份進行(xing)。 通(tong)過(guo)分析(xi)(xi)通(tong)常在葡萄酒中發現的(de)兩種(zhong)不同濃度的(de)五種(zhong)加標模型葡萄酒溶液來評估方(fang)法的(de)重復(fu)性。 所(suo)有(you)化合(he)物的(de)相對標準偏差 (RSD %) 均低于(yu) 10%。

酚類化(hua)合(he)物(wu)(wu)的(de)(de) HPLC：根據(ju) Van De Casteele 等人的(de)(de)方法，使(shi)(shi)用(yong)帶有(you) PDA 檢測器的(de)(de) HPLC 測定單個(ge)酚類化(hua)合(he)物(wu)(wu)（兒茶素、表(biao)兒茶素、沒食子酸、咖啡(fei)酸、對(dui)香(xiang)豆酸、阿魏酸和花青(qing)素）的(de)(de)濃(nong)度. (1983)。 為了量化(hua)，酚類化(hua)合(he)物(wu)(wu)的(de)(de)標(biao)(biao)準(zhun)溶液以(yi)通常在葡萄酒中發現的(de)(de)濃(nong)度范圍內的(de)(de)濃(nong)度使(shi)(shi)用(yong)。 結(jie)果表(biao)示為mg咖啡(fei)酸當量/L。 所(suo)有(you)分析均一式(shi)兩份(fen)進行。 所(suo)有(you)化(hua)合(he)物(wu)(wu)的(de)(de)重(zhong)復(fu)性相對(dui)標(biao)(biao)準(zhun)偏差(cha) (RSD %) 均低于 8%。

GC-FID 檢(jian)測揮發(fa)性化(hua)(hua)合(he)物(wu)：將含有 50 mL 4-甲基(ji)-2-戊醇(chun)(chun) (10 g/L) 水(shui)醇(chun)(chun)溶(rong)液作(zuo)為(wei)內標(biao)的(de)葡(pu)萄酒樣品 (5 mL) 直接注(zhu)射到(dao)(dao) Carlo Erba（GC 8000 系列(lie)）上配(pei)備火焰離子化(hua)(hua)檢(jian)測器 (EL 980) 和(he) 50 m * 0.32 mm 內徑、0.20 mm CPCarbowax 400 (Varian Inc., USA) 毛細管柱的(de)氣(qi)相色譜(pu)儀。 烘箱溫(wen)度(du)保持在50℃下(xia)10分(fen)鐘(zhong)，編程到(dao)(dao)80℃下(xia)5℃/min，然后在80℃下(xia)保持10分(fen)鐘(zhong)。 進(jin)樣器和(he)檢(jian)測器溫(wen)度(du)分(fen)別為(wei) 200 和(he) 230 ℃。 進(jin)樣 (1 mL) 以分(fen)流模式(shi) (150 mL/min) 完成。 氦氣(qi)是載氣(qi) (2 mL/min, 90 kPa)。 揮發(fa)性化(hua)(hua)合(he)物(wu)（乙(yi)(yi)醛、甲醇(chun)(chun)、乙(yi)(yi)酸(suan)乙(yi)(yi)酯(zhi)、1-丙醇(chun)(chun)、2-甲基(ji)-1-丙醇(chun)(chun)、2-甲基(ji)-1-丁醇(chun)(chun)和(he)3-甲基(ji)-1-丁醇(chun)(chun)）通過比較保留時間與參考化(hua)(hua)合(he)物(wu)。 為(wei)了量化(hua)(hua)，揮發(fa)物(wu)的(de)標(biao)準(zhun)(zhun)溶(rong)液以通常在葡(pu)萄酒中發(fa)現的(de)濃度(du)范圍(wei)內的(de)濃度(du)使(shi)用（Bertrand，1968 年；Gkoulioti，2000 年）。 所(suo)有分(fen)析均(jun)一式(shi)兩(liang)份進(jin)行(xing)。 通過分(fen)析通常在葡(pu)萄酒中發(fa)現的(de)兩(liang)種不(bu)同(tong)濃度(du)的(de)五種加標(biao)模型葡(pu)萄酒溶(rong)液來評估該方(fang)法的(de)重復性。 獲得的(de)相對標(biao)準(zhun)(zhun)偏(pian)差 (RSD %) 在 3.5% 和(he) 8.2% 之間變化(hua)(hua)。

2.4.3. 統計分(fen)析

相關分(fen)(fen)析(xi)被(bei)用于檢驗葡萄酒的(de)表面張(zhang)力(li)和(he)化學成分(fen)(fen)之間的(de)線性(xing)關系(xi)。 為了獲得預(yu)測方(fang)程，使用了單一(yi)和(he)多元回歸分(fen)(fen)析(xi)。 使用SPSS軟(ruan)件，版本(ben)14.0進行計算。

葡萄酒的表面張力與酒本身的成分之間的相關性論文——摘要、簡介

葡萄酒的表面張力與酒本身的成分之間的相關性論文——材料和方法

葡萄酒的表面張力與酒本身的成分之間的相關性論文——結果與討論

葡萄酒的表面張力與酒本身的成分之間的相關性論文——結論、致謝！